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首頁 > 新聞中心 > 液相色譜儀幾方面的介紹

液相色譜儀幾方面的介紹

點擊次數:3191 發布時間:2010-01-11
1、高山壓恒流泵
特點:雙泵頭串聯式
  微機控制 通過鍵盤設定參數(時間、流量、壓力、淋洗液比例)。
  單相閥、活塞、閥座均為寶石耐磨損;密封圈為特種塑料耐高壓。
  10種工作程序 具有過壓保護、斷電保護及自診斷等功能。
  可作單泵恒流輸出或雙泵梯度淋洗。
創新:為了消除壓力波動,凸輪曲線以阿基米德螺旋線為基線再加以修正;采用混合式4相8拍步進電機,并由細分16步的驅動器驅動;增加機械微調和特制的緩沖器;實時微機控制,壓力及時反饋,從而消除壓力波動,攻克了長期阻撓我國液相色譜儀前進步伐的"輸出壓力高且穩定"的技術難關。
2、紫外分光檢測器
特點:
  - 先進的光學系統
  全息凹面光柵、光纖分光構成全新概念的雙光束分光。
  - 微機控制
  鍵盤設定控制步進電機調動光柵選定波長(固定波長、局部掃描、全程自動掃描、單步和能量測試)
創新:紫外分光檢測器是液相色譜儀關鍵之所在,而靈敏度是紫外分光檢測器的關鍵之所在。為了降低噪音提高靈敏度,我們開發出*的光路系統:采用全息凹面光柵,不用反射鏡(反射一次損失20%光能),通過光纖分光去除雜散光簡化了光路;利用微機進行基線跟蹤和噪聲處理。這樣不僅減少了光能量傳輸損耗,保證zui大光能量;而且大大提高了信噪比,保證了靈敏度高、穩定快。
3、色譜分離柱
3-1 柱的結構
  1、堵棒(或導管)2、接頭 3、接頭 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、過濾片
        3-2 柱的分類:
根據所有的擔體材料分為三種:
  a.硅膠型:機械強度高,易制成小顆粒,理論塔板數高。
  b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內穩定
  c.羥基磷灰石型:對蛋白質等生物高分子樣品有特殊的選擇性。
根據分離方式分類:
  a.硅膠型
   1) 正相:SIL--磷脂、NH--糖、維生素E,CN--甾類激素。
   2) 反相:ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物。
   3) 離子交換:
     WAX(弱堿陰離子交換)--核苷酸、蛋白質
     WCX(弱酸陽離子交換)--蛋白質
     SAX(強堿陰離子交換)--核苷酸
     SCX(強酸陽離子交換)--兒茶酚膠
4)凝膠過濾:
     Diol--蛋白質 GF--蛋白質
  b.聚合物型:
   1)反相:ODP--50--肽,蛋白質,低分化合物。
   2)離子交換:ISC--氨基酸,胍類化合物,ISA--糖,IC--無機離子,PA--蛋白質,ES--蛋白質。
   3)配位交換:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖。
   4)離子排阻:SCR-101H 102H--有機酸
   5)凝膠過濾:ION--多糖 GS--水溶性分子
   6)凝膠滲透色譜(GPC):GPD--合成分子、橡膠。
   7)羥基磷灰石型:HPC--蛋白質、核苷酸
按尺寸分類:
  1.制備:30mm 50mm 內徑,半制備:20mm內徑。
  2.分析:標準型柱:4_8mm內徑。
      快速色譜柱:3mm內徑、5cm長、4.6mm內徑。
      小孔徑柱:2.5mm內徑,微孔徑柱1mm內徑。
3-3柱的技術指標
  *耐壓:不小于40Mpa。
  *滲透性:反相--流動相甲醇1ml/min,壓力3Mpa。
       正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
  *柱效:理論塔板極數>3x103
  *對稱柱:葸峰不對稱因子AS在0.8~2.0范圍內。
  *外觀:光潔、標牌、尺寸、填充劑、流動相方向、日期等
ODS柱
  ODS(C18)色譜柱是將十八烷基鍵合在擔體的表面,然后填充的柱,在HPLC中應用廣。在HPLC中反相色譜的引用占70%,其中極大部分 使用的是ODS(C18)。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,內徑4.6mm,長度150mm。
一般反相色譜系統,流動相為極性溶劑,如水、甲醇、乙腈,非極性固定相,如十八烷基。反相系統簡單,重復性好,柱子能長期穩 定工作,能完成分離、分析任務的60-80%,所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
柱的使用和維護
  由于柱的質量直接影響到樣品組分得分離情況,組分的定性,定量分析,所以在操作時必須十分注意。
  通常柱子損壞表現為:柱壓升高,柱效下降,保留值改變,峰形崎變等。
以反相為列,它要求填料處于甲醇或乙腈中,不使柱子干枯,并注意下列事項:
  * 勿使柱子受較強振動
  * 較長時間不用時,應在柱中充滿甲醇,并把兩頭封死,盡量不使干枯。
  * 當用水和甲醇(或乙腈)混合液體溶劑時,工作結束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個小時,使柱子處于甲醇中,因水   易繁殖微生物, 使柱子堵塞,并降低柱效。
  * 當使用KH2PO4等緩沖液時,鹽的濃度宜低,否則鹽容易析出,柱效降低,柱壓升高,使用后   必須用水沖洗( 絕不能用甲醇沖洗)使緩沖液全部溶于水排出,然后再用甲醇沖洗。
  * 硅基固定相不宜在PH>8時使用,此時容易產生絮狀物析出,堵塞柱子。
  * 當流動相呈酸性時,使用后必須用水沖洗,因酸使柱效降低,后再用甲醇沖洗。
  * 流動相經過過濾處理。
  * 樣品也經過過濾處理。
  * 樣品有時能復蓋填料得活性點,使柱壓升高,保留時間下降,防止方法是樣品經過過濾。
  * 樣品組分的不可逆吸附,使柱壓升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白質、糖)防止方法是加保護柱和溶劑反沖,   zui常用的是四氫呋喃。
  * 當流動相從A換到B時,A、B不相溶,必須選擇一能同A、B互溶劑C,先換成C再把C換成B,zui常用的中間液是異丙醇。
  * 由于長期使用,在較大的壓力下,擔體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,峰形畸變。維護方法:卸下   接頭,用甲醇把填料調成糊狀,填入柱內,同時將過濾片用超聲波清洗機清洗一次
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