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如何解決色譜柱使用過程中出現的問題

點擊次數:1538 發布時間:2009-11-12


如何解決色譜柱使用過程中出現的問題

1).保留值與分離度重現性不好原因分析
問題 原因 表現
不同色譜柱間差異 填料,鍵合相不同 保留因子(k),分離因子(α)
使用期間柱變化 柱床破壞 柱效(N)
鍵合相丟失 保留因子(k),分離子(α)
硅膠基質溶解 柱效(N)
強保留分堆積堵塞 保留因子(k),柱效(N)
柱外效應 系統差異,進樣量大, 柱效(N)
進樣閥與 色譜柱之間,
色譜柱與檢測器之間管
路太長,檢測器流通池
體積大,接頭死體積大等.
分離效果變差 流動相組分改變 保留因子(k),柱效變化很小 
流速改變 保留因子(k),分離因子(α)
溫度改變 保留因子(k),柱效變化很小
柱平衡慢 重新平衡時間不夠 保留因子(k),柱效變化很小
柱超載 樣品量太大 保留因子(k),柱效(N)

2).造成色譜峰(不對稱)拖尾的原因
1.色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷;
2.柱頭有污染;
3樣品超載;
4樣品溶劑不合適;
5.柱外效應;
6化學或二次保留(硅羥基)效應;
7緩沖容量不足或不合適;
8重金屬污染.

3).如何解決峰形拖尾的問題
A.與化學有關的拖尾問題
1.流動相中,加入30mM的三乙胺(用與堿性化合物)或醋酸胺(用與酸性化合物),未 知化合物加醋酸三乙胺;
2.如仍然拖尾,將三乙胺換為二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);
3.降低進樣量至<1ug.
B.與色譜柱有關的拖尾問題
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚,反相柱可用20倍柱體積的96%的二碌甲烷與4%甲 醇,加1%氫氧化銨混合液沖洗,正向柱可用甲醇沖洗.
2.使用保護柱
C.與HPLC 系統有關的峰拖尾和峰加寬
1.進樣體積過大,(通常≤25uL);
2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大(*連接管應<20cm,內徑為0.007〃);
3.檢測器流通池的體積過大.

4).如何儲存色譜柱
1.防止緩沖溶液和水溶液流動相產生微生物,做到流動相用多少配多少,或在水流動相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細菌成長(一定當心其毒性和潛在的爆炸性);或在流動相中加20%的有機改性劑,也可抑制微生物生長,有機改性劑還有助于流動相脫氣.
2.盡可能將色譜柱貯存于100%有機溶劑(乙晴)中,避免在緩沖溶液中保存.
3.使用緩沖溶液后的色譜柱,應用15~20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機溶劑流動相沖洗色譜柱,后換成100%有機溶劑儲存.
4.避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱.






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